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    PCR技术

    发布时间: 2025-05-12  点击次数: 13次

    PCR(聚合酶链式反应)技术由美国生物化学家凯利·穆利斯于1983年发明,其核心原理是通过高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤的循环,利用DNA聚合酶特异性扩增目标DNA片段。


    早期的PCR扩增受限于耐高温酶的缺失,效率非常低,因此在科研实验领域接受度并不高。

    直至1986年,水生栖热菌来源的Taq酶的应用,才实现PCR稳定、自动化的高效扩增。

    PCR实验技术一直以来不断发展,例如基于普通PCR技术通过优化反应流程而衍生的巢式PCR、基于热启动酶提高扩增特异性的Hot start PCR、基于荧光检测技术而发展qPCR、基于芯片微孔扩增实现更高精度分析的数字PCR等。
    一般,正常的PCR反应过程会经历3个核心阶段:
    1 高温95℃解开DNA模板(热变性)
    2 降温45-60℃使特异性引物与单链DNA互补结合(退火)
    3 再次升温至72℃,耐热Taq DNA聚合酶沿模板从引物3'端开始合成互补链(延伸)
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